2. ব্যবহারের আগে পাতিত জল দিয়ে 1:40 হারে ধোয়ার বাফার পাতলা করুন।
3. সংশ্লিষ্ট কূপে 100μL স্যাম্পল ডিলুয়েন্ট যোগ করুন (খালি কূপে যোগ করবেন না, নেতিবাচক
কূপ নিয়ন্ত্রণ করুন এবং ভাল নিয়ন্ত্রণ করুন।) নমুনাটি মাইক্রো সংখ্যার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ হওয়া উচিত
প্লেট, প্রতিটি প্লেট ঋণাত্মক নিয়ন্ত্রণ 2 কূপ, ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ 1 ভাল এবং ফাঁকা সঙ্গে প্রদান করা উচিত
নিয়ন্ত্রণ 1 ভাল. সংশ্লিষ্ট কূপে 5μL নমুনা যোগ করুন, পাইপেট ব্যবহার করে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করুন, যোগ করুন
50μL নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ কূপ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ ভাল (করবেন না
ফাঁকা ভাল যোগ করুন)।
দ্রষ্টব্য: প্রতিটি নমুনার জন্য একটি পৃথক নিষ্পত্তি পাইপেট টিপ ব্যবহার করুন, নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ
ক্রস দূষণ এড়ান।
4. 30 সেকেন্ডের জন্য মেশানোর জন্য আলতো করে ঝাঁকান। সিলিং প্লেট মেমব্রেন দিয়ে 20 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেট করুন
প্লেট সিল করা।
5. ইনকিউবেশন শেষে, প্লেট কভারটি সরিয়ে ফেলুন এবং বাদ দিন। আউট নিন, ওয়াশ বাফার যোগ করুন
প্রতিটি ভাল 20 সেকেন্ডের জন্য। 5 বার পুনরাবৃত্তি করুন। চূড়ান্ত ওয়াশিং চক্রের পরে, প্লেটটি চালু করুন
ব্লটিং পেপার বা পরিষ্কার তোয়ালে, এবং কোনো অবশিষ্টাংশ সরাতে এটি আলতো চাপুন।
6. যথাক্রমে এনজাইম কনজুগেট 50µL যোগ করা (ফাঁকা কূপে যোগ করবেন না)
7. সিলিং প্লেট মেমব্রেন প্লেট সিল করে 20 মিনিটের জন্য 37°C তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করুন। পুনরাবৃত্তি করুন
ধাপ 5 এর মতো 5 বার ধাপ ধুয়ে নিন।
8. সাবস্ট্রেট A 50µL এবং সাবস্ট্রেট B 50µL যোগ করুন (খালি কূপে যোগ করবেন না)। জন্য 37 ℃ এ ইনকিউবেট
10 মিনিট সিলিং প্লেট ঝিল্লি সঙ্গে প্লেট sealing.
9. প্রতিটি কূপে 50μL স্টপ সলিউশন যোগ করুন (খালি কূপে যোগ করবেন না)। ঝাঁকিয়ে আলতো করে মেশান, পড়ুন
প্রতিক্রিয়া বন্ধ করার পর 10 মিনিটের মধ্যে শোষণ। ব্ল্যাঙ্ক দিয়ে প্লেট রিডার ক্যালিব্রেট করুন
ভালভাবে এবং 450nm এ শোষণ পড়ুন। যদি একটি ডুয়াল ফিল্টার যন্ত্র ব্যবহার করা হয়, তাহলে রেফারেন্স সেট করুন
630nm এ তরঙ্গদৈর্ঘ্য। শনাক্ত করতে দ্বৈত তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করলে কোন ফাঁকা কূপ সেট করার অনুমতি নেই। গণনা করুন
কাট-অফ মান এবং ফলাফল মূল্যায়ন.
ক্রোনোমেট্রি: একটি মাইক্রো প্লেট রিডার দিয়ে 450nm এ নমুনার অপটিক্যাল ঘনত্ব (OD) পড়ুন।
গড় নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ OD মান ≤ 0.1 এবং গড় পজিটিভ নিয়ন্ত্রণ OD মান ≥ 0.8, পরীক্ষাটি বৈধ,
অন্যথায় পরীক্ষাটি অবৈধ।
কাট-অফ মান (CO) = ঋণাত্মক নিয়ন্ত্রণ x 3-এর গড় OD মান (0.10 দ্বারা গণনা করা হয় যখন গড়
নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ OD মান হল < 0.10, প্রকৃত মান দ্বারা গণনা করা হয় যখন গড় নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ OD
মান হল > 0.10)
ইতিবাচক ফলাফল: নমুনা OD মান ≥ CO
আপনার বার্তাটি 20-3,000 টির মধ্যে হতে হবে!
Bengali
