অ্যান্টি থাইরয়েড পারক্সিডেস এলিসা টেস্ট কিট অ্যান্টি টিপিও অ্যান্টিবডি টেস্ট কিট

অ্যান্টি-টিপিও অ্যান্টি-থাইরয়েড পারক্সিডেস এলিসা কিট

1. উদ্দেশ্য ব্যবহার

মানব সিরামে থাইরয়েড পারক্সিডেসের অ্যান্টিবডিগুলির ইন ভিট্রো পরিমাণগত নির্ধারণের জন্য ইমিউনোসাই।অটোইমিউন থাইরয়েড রোগ নির্ণয়ের ক্ষেত্রে অ্যান্টি-টিপিও সংকল্প ব্যবহার করা হয়।

2. সারাংশ 

• থাইরয়েড-নির্দিষ্ট পেরক্সিডেস (TPO) থাইরোসাইটের মাইক্রোসোমে উপস্থিত থাকে এবং এটির apical কোষ পৃষ্ঠে প্রকাশ করা হয়।থাইরোগ্লোবুলিন (Tg) এর সাথে সমন্বয়ে এই এনজাইমের একটি অপরিহার্য কাজ রয়েছে এল-টাইরোসিনের আয়োডিনেশনে এবং ফলস্বরূপ মনো-এবং ডাই-আয়োডোটাইরোসিনের রাসায়নিক সংযোগে থাইরয়েড হরমোন T4, T3 এবং fT3 গঠনের জন্য।
• TPO একটি সম্ভাব্য অটোঅ্যান্টিজেন।TPO-তে অ্যান্টিবডির উন্নত সিরাম টাইটার পাওয়া যায় অটোইমিউনিটি দ্বারা সৃষ্ট থাইরয়েডাইটিসের বিভিন্ন রূপ।"মাইক্রোসোমাল অ্যান্টিবডি" শব্দটি প্রায়শই পাওয়া যায় সেই সময় থেকে যখন TPO এখনও মাইক্রোসোম দ্বারা সৃষ্ট অটোইমিউনিটির অ্যান্টিজেন হিসাবে চিহ্নিত হয়নি।ক্লিনিকাল অর্থে অ্যান্টি-টিপিও এবং মাইক্রোসোমাল অ্যান্টিবডি দুটি শব্দ সমার্থকভাবে ব্যবহার করা যেতে পারে;পার্থক্য আছে, যাইহোক, পরীক্ষার পদ্ধতির ক্ষেত্রে।
• দীর্ঘস্থায়ী হাশিমোটোর থাইরয়েডাইটিস রোগীদের 90% পর্যন্ত উচ্চ-টিপিও টাইটার পাওয়া যায়।গ্রেভস রোগে, 70% রোগীর একটি উন্নত টাইটার থাকে।যদিও প্রক্রিয়াটির সংবেদনশীলতা একই সাথে অন্যান্য থাইরয়েড অ্যান্টিবডি (অ্যান্টি-টিজি, টিএসএইচ-রিসেপ্টর-অ্যান্টিবডি - TRAb) নির্ধারণ করে বাড়ানো যেতে পারে, তবে একটি নেতিবাচক ফলাফল অটোইমিউন রোগের সম্ভাবনাকে উড়িয়ে দেয় না।অ্যান্টিবডি টাইটারের মাত্রা রোগের ক্লিনিকাল কার্যকলাপের সাথে সম্পর্কযুক্ত নয়।প্রাথমিকভাবে উন্নত টাইটারগুলি দীর্ঘস্থায়ী অসুস্থতার পরে বা ক্ষমা করার সময় নেতিবাচক হতে পারে।যদি মওকুফের পরে অ্যান্টিবডিগুলি পুনরায় আবির্ভূত হয়, তবে পুনরায় সংক্রমণের সম্ভাবনা রয়েছে।
• যেখানে সাধারণ মাইক্রোসোমাল অ্যান্টিবডি পরীক্ষাগুলি অ্যান্টিজেন প্রস্তুতি হিসাবে অপরিশোধিত মাইক্রোজোম ব্যবহার করে, অ্যান্টি-টিপিও পরীক্ষাগুলি একটি বিশুদ্ধ পারক্সিডেস ব্যবহার করে।ক্লিনিকাল সংবেদনশীলতার পরিপ্রেক্ষিতে দুটি পদ্ধতির তুলনামূলক কার্যকারিতা, তবে ব্যবহৃত অ্যান্টিজেনের উচ্চ মানের কারণে অ্যান্টি-টিপিও পরীক্ষা থেকে আরও ভাল অনেক-টু-লট ধারাবাহিকতা এবং উচ্চতর ক্লিনিকাল নির্দিষ্টতা আশা করা যেতে পারে।এনজাইম যুক্ত ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাসেস মানব অ্যান্টিজেন এবং ব্যবহার করে খরগোশের মানব-বিরোধী আইজিজি অ্যান্টিবডি (আইজিজি-বিরোধী)।

3. পরীক্ষার নীতি

পরোক্ষ পদ্ধতি, পরীক্ষার মোট সময়কাল: 70 মিনিট।

অ্যান্টি-টিপিও এলিসা শক্ত ফেজ, পরোক্ষ এলিসা পদ্ধতি ব্যবহার করে যাতে দুই-ধাপে ইনকিউবেশন পদ্ধতিতে টিপিও-তে অ্যান্টিবডি সনাক্ত করা যায়।পলিস্টাইরিন মাইক্রোওয়েল স্ট্রিপগুলি অত্যন্ত ইমিউনোরেক্টিভ হিউম্যান টিপিও অ্যান্টিজেনগুলির সাথে প্রি-লেপযুক্ত।প্রথম ইনকিউবেশন ধাপের সময়, অ্যান্টি-টিপিও নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি, যদি উপস্থিত থাকে, তাহলে কঠিন পর্যায়ে প্রি-কোটেড টিপিও অ্যান্টিজেনের সাথে আবদ্ধ হবে।অবাউন্ড সিরাম প্রোটিন অপসারণের জন্য কূপগুলি ধুয়ে ফেলা হয়, এবং খরগোশের মানব-বিরোধী আইজিজি অ্যান্টিবডি (এন্টি-আইজিজি) এনজাইম হর্সরাডিশ পারক্সিডেস (এইচআরপি- কনজুগেট) এর সাথে যুক্ত করা হয়।দ্বিতীয় ইনকিউবেশন ধাপের সময়, এই এইচআরপি-সংযোজিত অ্যান্টিবডিগুলি পূর্বে গঠিত যেকোন অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি (আইজিজি) কমপ্লেক্সের সাথে আবদ্ধ হবে এবং অবাউন্ড এইচআরপি-কঞ্জুগেটকে ধুয়ে ফেলার মাধ্যমে অপসারণ করা হবে।Tetramethylbenzidine (TMB) এবং ইউরিয়া পারক্সাইড ধারণকারী ক্রোমোজেন দ্রবণগুলি কূপে যোগ করা হয় এবং অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি-অ্যান্টি-আইজিজি (HRP) ইমিউনো কমপ্লেক্সের উপস্থিতিতে, বর্ণহীন ক্রোমোজেনগুলি একটি নীল রঙের পণ্যে আবদ্ধ HRP দ্বারা হাইড্রোলাইজ করা হয়।সালফিউরিক অ্যাসিডের সাথে বিক্রিয়া বন্ধ করার পরে নীল রঙ হলুদ হয়ে যায়।

রঙের তীব্রতার পরিমাণ পরিমাপ করা যেতে পারে এবং এটি কূপে বন্দী অ্যান্টিবডির পরিমাণ এবং নমুনায় যথাক্রমে অ্যান্টিবডির পরিমাণের সমানুপাতিক।

4. রিএজেন্ট উপাদান প্রদান করা হয়

• প্রলিপ্ত মাইক্রোপ্লেট, 8 x 12 স্ট্রিপ, 96টি কূপ।মানব TPO অ্যান্টিজেনের সাথে প্রাক-প্রলিপ্ত।

• ক্যালিব্রেটর, 6টি শিশি, 1 এমএল প্রতিটি, ব্যবহারের জন্য প্রস্তুত;ঘনত্ব: 0(A), 25(B) ,50(C), 100(D), 250(E) এবং 500(F) IU/mL।

• এনজাইম কনজুগেট, 1 শিশি, BSA (বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন) ধারণকারী Tris-NaCl বাফারে খরগোশ-বিরোধী-মানবীয় IgG অ্যান্টিবডি (অ্যান্টি-IgG) লেবেলযুক্ত HRP-এর 11.0 mL।0.1% ProClin300 প্রিজারভেটিভ রয়েছে।

• সিরাম ডাইলুয়েন্ট: 1 শিশি, 11 মিলি।বাফার সল্ট এবং একটি রঞ্জক ধারণকারী

• ওয়াশ সলিউশন কনসেনট্রেট, 1 শিশি, 25 মিলি (40X ঘনীভূত), পিবিএস-টুইন ওয়াশ দ্রবণ।

• সাবস্ট্রেট, 1 শিশি, 11ml, ব্যবহারের জন্য প্রস্তুত, (tetramethylbenzidine) TMB।

• স্টপ সলিউশন, 1 শিশি, 1 mol/l সালফিউরিক অ্যাসিডের 6.0 মিলি।

• IFU, 1 কপি।

• প্লেট ঢাকনা: 2 টুকরা।

প্রয়োজনীয় উপকরণ (কিন্তু প্রদান করা হয়নি)

• 450nm এবং 620nm তরঙ্গদৈর্ঘ্য শোষণ ক্ষমতা সহ মাইক্রোপ্লেট রিডার।

• মাইক্রোপ্লেট ওয়াশার।

• ইনকিউবেটর।

• প্লেট শেকার.

• মাইক্রোপিপেটস এবং মাল্টিচ্যানেল মাইক্রোপিপেট 1.5% এর চেয়ে ভাল নির্ভুলতার সাথে 50µl সরবরাহ করে।

• শোষক কাগজ।

• বিশুদ্ধ পানি

5. পরীক্ষা পদ্ধতি

• শুধুমাত্র প্রয়োজনীয় কূপের সংখ্যা ব্যবহার করুন এবং প্রতিটি ক্যালিব্রেটর এবং নমুনা পরীক্ষা করার জন্য মাইক্রোপ্লেট কূপগুলি ফর্ম্যাট করুন।

• প্রতিটি কূপে 100 μL ক্যালিব্রেটর যোগ করুন।

• ক্যালিব্রেটর-কূপগুলি ব্যতীত প্রতিটি কূপে 100 μL নমুনা পাতলা (সবুজ রঙ) যোগ করুন।

• প্রতিটি স্যাম্পল ডিলুয়েন্ট কূপে 10 μL নমুনা যোগ করুন (দ্রষ্টব্য: কূপের রিএজেন্টগুলি সবুজ থেকে নীল রঙে পরিণত হবে), তারপর 30 সেকেন্ড ঝাঁকান।

• প্লেটটিকে একটি প্লেটের ঢাকনা দিয়ে ঢেকে রাখুন এবং 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের জন্য জ্বাল দিন।

• ডিক্যান্টেশন বা আকাঙ্খা দ্বারা মাইক্রো প্লেটের বিষয়বস্তু বাদ দিন।ডিক্যান্টিং হলে, শোষক কাগজ দিয়ে প্লেটটি শুকিয়ে ট্যাপ করুন এবং ব্লট করুন।

• 350 μL ওয়াশ সলিউশন, ডিক্যান্ট (ট্যাপ এবং ব্লট) বা অ্যাসপিরেট যোগ করুন।মোট 5টি ধোয়ার জন্য 4 অতিরিক্ত বার পুনরাবৃত্তি করুন।ধোয়ার শেষে, প্লেটটি উল্টে দিন এবং শোষক কাগজের উপর যেকোন অবশিষ্ট ধোয়ার দ্রবণটি আলতো চাপুন।

• 100 μL এনজাইম কনজুগেট যোগ করুন,

• প্লেটটিকে একটি প্লেটের ঢাকনা দিয়ে ঢেকে রাখুন এবং 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের জন্য জ্বাল দিন।

• 350 μL ওয়াশ সলিউশন, ডিক্যান্ট (ট্যাপ এবং ব্লট) বা অ্যাসপিরেট যোগ করুন।মোট 5টি ধোয়ার জন্য 4 অতিরিক্ত বার পুনরাবৃত্তি করুন।ধোয়ার শেষে, প্লেটটি উল্টে দিন এবং শোষক কাগজের উপর যেকোন অবশিষ্ট ধোয়ার দ্রবণটি আলতো চাপুন।

• প্রতিটি কূপে 100 μL সাবস্ট্রেট যোগ করুন।10 মিনিটের জন্য প্রতিক্রিয়ার জন্য অন্ধকারে পরিবেষ্টিত তাপমাত্রায় (18-25℃) ঢেকে রাখুন।সাবস্টেট যোগ করার পরে প্লেট ঝাঁকান না।

• প্রতিটি কূপে 50 μL স্টপ দ্রবণ যোগ করুন।

• কূপের মধ্যে তরল মেশানোর জন্য 15-20 সেকেন্ডের জন্য ঝাঁকান।এটি নিশ্চিত করা গুরুত্বপূর্ণ যে নীল রঙ সম্পূর্ণরূপে হলুদে পরিবর্তিত হয়।

• একটি মাইক্রো প্লেট রিডারে প্রতিটি কূপের শোষণ 450 এনএম ( রেফারেন্স তরঙ্গদৈর্ঘ্য হিসাবে 620 থেকে 630 এনএম ব্যবহার করে ভাল অসম্পূর্ণতা কমাতে) পড়ুন।স্টপ সমাধান যোগ করার 30 মিনিটের মধ্যে ফলাফল পড়া উচিত।