হিউম্যান ইমিউনোডেফিসিয়েন্সি ভাইরাসের জন্য হিউম্যান অ্যান্টি এইচআইভি 1 এবং 2 এলিসা টেস্ট কিট

3. পরীক্ষা পদ্ধতি

• ব্যবহারের আগে সমস্ত উপাদানকে ঘরের তাপমাত্রায় পৌঁছানোর অনুমতি দিন।ddH2O দিয়ে ঘনীভূত ধোয়ার বাফার 1:20 পাতলা করুন।
• দুটি ইতিবাচক এবং তিনটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ সেট করুন।100μl পজিটিভ কন্ট্রোল (এইচআইভি-1 এবং এইচআইভি-2) এবং সেইসাথে নেতিবাচক কন্ট্রোল নমুনা তরল ছাড়াই নিজ নিজ কূপে নকল করুন।কোনো তরল যোগ না করে একটি ফাঁকা ভাল ব্যাকগ্রাউন্ড নিয়ন্ত্রণ সেট করুন।প্রতিটি পরীক্ষা কূপে 50μl নমুনা তরল যোগ করুন, পরীক্ষা কূপের মধ্যে 50 μl টেস্ট সিরাম বা প্লাজমা যোগ করুন।
• মাইক্রোটাইটার প্লেটটিকে একটি আর্দ্র বাক্সে রাখুন এবং 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের জন্য সেঁকুন।
• প্রতিক্রিয়া সমাধান বাতিল করুন এবং প্রতিটি কূপে 350μl মিশ্রিত ধোয়ার বাফার যোগ করুন।15-30 সেকেন্ড ভিজিয়ে রাখার পর ধোয়ার বাফারটি ফেলে দিন।ধোয়ার পদ্ধতিটি 5 বার পুনরাবৃত্তি করুন এবং তারপরে সমস্ত জল বের করতে এবং কয়েক সেকেন্ডের জন্য শোষক কাগজে কূপের রিম ব্লক করতে জোরালোভাবে প্লেটটি উল্টে দিন।
• প্রতিটি কূপে 100μl এনজাইম কনজুগেট যোগ করুন।1 মিনিটের জন্য ফ্ল্যাট বেঞ্চে মাইক্রোটাইটার প্লেটটি ঘোরানোর মাধ্যমে এটিকে আলতোভাবে মেশান।ফাঁকা কূপে এনজাইম কনজুগেট যোগ করবেন না..
• মাইক্রোটাইটার প্লেটটিকে একটি আর্দ্র বাক্সে রাখুন এবং 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের জন্য সেঁকুন।
• পাতলা 1X ওয়াশ বাফার দিয়ে প্রতিটি কূপ ভরাট করে প্রতিটি কূপ 5 বার ধুয়ে ফেলুন, তারপর সমস্ত জল বের করার জন্য প্লেটটিকে জোরে জোরে উল্টে দিন এবং কয়েক সেকেন্ডের জন্য শোষক কাগজে কূপের রিম ব্লক করুন।
• প্রতিটি কূপে 50μl সাবস্ট্রেট সলিউশন A (HRP সাবস্ট্রেট) যোগ করুন, তারপর প্রতিটি কূপে 50μl সাবস্ট্রেট সলিউশন B (TMB) যোগ করুন।আলতোভাবে মেশান এবং 15 মিনিটের জন্য 37 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে সেঁকুন।
• রঙের প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে প্রতিটি কূপে এক ফোঁটা (50μl) স্টপ সলিউশন যোগ করুন।
• ডুয়াল ফিল্টার প্লেট রিডার সহ 450 nm/630 nm এ OD মান পড়ুন।এটি একক ফিল্টার প্লেট রিডার সহ 450 nm এ OD মান পড়ার বিকল্প।(সমস্ত কূপ থেকে সমস্ত OD রিডিং সংশোধন করতে ফাঁকা কূপের OD মান ব্যবহার করে