হেপাটাইটিস বি ভাইরাস কোর অ্যান্টিজেনের (এইচবিসিএবি) বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি

এলিসা টিইস্টকেএটা

শুধুমাত্র ইন ভিট্রো ডায়াগনস্টিক এবং পেশাদার ব্যবহারের জন্য।

পণ্যের নাম

এন্টি-এইচবিসি এলআইএসএ টেস্ট কিট (সিরাম/প্লাজমা)

উদ্দেশ্যযুক্ত ব্যবহার

এই এন্টি-এইচবিসি এলআইএসএ টেস্ট কিটটি মানব সিরাম/প্লাস্মাতে হেপাটাইটিস বি ভাইরাস কোর অ্যান্টিজেন (এইচবিসিএবি) এর অ্যান্টিবডিগুলির গুণগত সনাক্তকরণ।মানব সিরাম/প্লাস্মাতে হেপাটাইটিস বি ভাইরাস সংক্রমণের ক্লিনিকাল স্ক্রিনিং এবং নির্ণয়ের জন্য এই রিএজেন্ট উপযুক্ত।.

পরীক্ষার নীতি

হেপাটাইটিস বি ভাইরাস (এইচবিভি) একটি এনভেলপ,ডাবল-স্ট্রেনড ডিএনএ ভাইরাস যা হেপডনাভিরাইডি পরিবারের অন্তর্গত এবং এটি হেপাটাইটিস সি ভাইরাস (এইচসিভি) এর সাথে রক্তে সংক্রামিত হেপাটাইটিসের প্রধান কারণ হিসাবে স্বীকৃতএইচবিভি সংক্রমণ হালকা, অস্পষ্ট রোগ থেকে শুরু করে ভয়াবহ হেপাটাইটিস, গুরুতর দীর্ঘস্থায়ী লিভার রোগ,যা কিছু ক্ষেত্রে লিভার সিরোসিস এবং কার্সিনোমা হতে পারেহেপাটাইটিস বি সংক্রমণের শ্রেণীবিভাগের জন্য সংক্রমণের তিনটি পর্যায়ে (উদ্দীপনা, তীব্র এবং পুনরুদ্ধার) প্রকাশিত বেশ কয়েকটি সেরোলজিক্যাল মার্কারের সনাক্তকরণ প্রয়োজন।

ভাইরাসের প্রধান উপাদান হল হেপাটাইটিস বি কোর অ্যান্টিজেন (এইচবিসিএজি) ।এই কোর অ্যান্টিজেনটি প্রায় 17kD এর একটি একক পলিপেপটাইডের সমন্বয়ে গঠিত যা কোর কণাগুলির বিচ্ছিন্নতার পরে মুক্তি পায়অ্যান্টিজেনের মধ্যে অন্তত একটি ইমিউনোলজিকাল ডিটারমিন্যান্ট উপস্থিত থাকে।

এইচবিএসএজির সূত্রপাতের কিছুক্ষণ পরে, এইচবিসিএজের (এন্টি-এইচবিসি টোটাল অ্যান্টিবডি এবং আইজিএম) অ্যান্টিবডিগুলি উপস্থিত হয় এবং কখনও কখনও চলে যায় না।একটি হেপাটাইটিস বি সংক্রমণ ইমিউনোলজিক্যালভাবে সনাক্তযোগ্য এন্টি-এইচবিসি ছাড়াই সংক্রামিত হতে পারে. এটি সাধারণত প্রতিরোধ ক্ষমতা হ্রাসপ্রাপ্ত রোগীদের মধ্যে পাওয়া যায়। অ্যান্টি-এইচবিসি স্ক্রিনিং বিভিন্ন জনগোষ্ঠীতে হেপাটাইটিস বি এর প্রাদুর্ভাব সম্পর্কে তথ্য দেয়। এটি কারণ অ্যান্টি-এইচবিসি তীব্র,দীর্ঘস্থায়ীএইচবিভি সংক্রমণের ক্ষেত্রে, এইচবিভি-র প্রতিরোধকগুলির সনাক্তকরণ ক্লিনিকাল পরিবেশে নির্ণয় করার সময় অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ।এন্টি-এইচবিসি মার্কার সঠিক রোগ নির্ণয় এবং ভাইরাসের অগ্রগতির সঠিক পর্যবেক্ষণের অনুমতি দেয়এন্টি-এইচবিসি সম্ভাব্যভাবে হেপাটাইটিস বি সংক্রমণের একমাত্র সূচক হতে পারে (এইচবিএসএজি-নেগেটিভ রোগীদের অন্যান্য পরীক্ষা সহ) ।

এইচবিসিএবি এলআইএসএ টেস্টের পদ্ধতিটি সলিড ফেজ, এক ধাপে ইনকিউবেশন প্রতিযোগিতামূলক নীতির উপর ভিত্তি করে। যখন এন্টি-এইচবিসি উপস্থিত থাকে,এটি মাইক্রোপ্লেটে প্রাক-আচ্ছাদিত বিশুদ্ধ HBcAg এর একটি নির্দিষ্ট পরিমাণের জন্য হর্স পেরক্সিডেস (HRP-Conjugate) এর সাথে সংযুক্ত একক ক্লোনাল অ্যান্টি-এইচবিসি এর সাথে প্রতিযোগিতা করে. যদি কোনও অ্যান্টি-এইচবিসি উপস্থিত না থাকে, তাহলে এইচআরপি-সংযুক্ত অ্যান্টি-এইচবিসি পুঁজীর ভিতরে অ্যান্টিজেনগুলির সাথে একসাথে আবদ্ধ হবে। ধোয়ার সময়, কোনও আনবন্ডড এইচআরপি-কনজিগেট সরানো হয়।ক্রোমোজেন সলিউশন এ এবং বি পুঁজীতে যোগ করার পর এবং ইনকিউবেশনের সময়, একটি নীল রঙের পণ্য প্রদর্শিত হয়। সালফিউরিক অ্যাসিডের সাথে প্রতিক্রিয়া বন্ধ হওয়ার পরে, নীল রঙ হলুদ হয়ে যায়। নমুনায় এইচবিসিএজি-র অ্যান্টিবডিগুলির উপস্থিতি নিম্ন রঙ দ্বারা নির্দেশিত হয়,অথবা কোন রঙ উপস্থিত নেই.

নমুনার প্রয়োজনীয়তা

1.নমুনা সংগ্রহঃরোগীর বিশেষ প্রস্তুতির প্রয়োজন নেই। সাধারণ পরীক্ষাগার অনুশীলন অনুসারে নমুনা সংগ্রহ করুন। এই পরীক্ষার জন্য তাজা সিরাম / প্লাজমা নমুনা ব্যবহার করা যেতে পারে।ভেনিপঙ্কশন দ্বারা সংগৃহীত রক্তকে স্বাভাবিকভাবে এবং সম্পূর্ণরূপে জমাট বাঁধতে দেওয়া উচিত ∙ সিরামকে যত তাড়াতাড়ি সম্ভব রক্ত জমাট বাঁধ থেকে আলাদা করা উচিত যাতে লাল রক্তের হিমোলাইসিস এড়ানো যায়সিরাম/প্লাস্মা নমুনা পরিষ্কার এবং অণুজীব দ্বারা দূষিত না হয় তা নিশ্চিত করার জন্য যত্ন নেওয়া উচিত।

2.এইচখুব বেশি লিপেমিক, ইকটেরিক বা হেমোলাইটিক নমুনাগুলি পরীক্ষা করা উচিত নয়। ব্যবহৃতকারণ তারা পরীক্ষায় ভুল ফলাফল দিতে পারে।তাপ নিষ্ক্রিয় করবেন না নমুনাএটি লক্ষ্য বিশ্লেষকের অবনতি ঘটাতে পারে। দৃশ্যমান মাইক্রোবায়াল দূষণের নমুনা কখনই ব্যবহার করা উচিত নয়।

3. এইচবিসিএবি এলআইএসএ কেবলমাত্র পৃথক সিরাম/প্লাস্মা নমুনা পরীক্ষা করার জন্য। মৃতদেহের নমুনা, লালা, প্রস্রাব বা অন্যান্য শরীরের তরল, বা পুঙ্খানুপুঙ্খ (মিশ্র) রক্ত পরীক্ষা করার জন্য এই পরীক্ষাটি ব্যবহার করবেন না।

4পরিবহন এবং সঞ্চয়স্থানঃ নমুনাগুলি ২-৮°C এ সংরক্ষণ করুন। ৩ দিনের মধ্যে পরীক্ষার জন্য প্রয়োজনীয় নমুনাগুলি হিমায়িত (২০°C বা তার কম) সংরক্ষণ করা উচিত। একাধিক হিমায়িত-ঘনচূর্ণ চক্র এড়ানো উচিত।পরিবহনের জন্য, নমুনাগুলি প্যাকেজ করা উচিত এবং ক্লিনিকাল নমুনা এবং এথোলজিকাল এজেন্টগুলির পরিবহনের জন্য বিদ্যমান স্থানীয় এবং আন্তর্জাতিক বিধিমালা অনুসারে লেবেল করা উচিত।

পরীক্ষার পদ্ধতি

1ব্যবহারের আগে সব রিএজেন্টকে ১৫ মিনিট রুমের তাপমাত্রায় থাকতে দেওয়া উচিত।

2ব্যবহারের আগে ওয়াশ বাফারকে ১ঃ৪০ ডিসটিলড ওয়াটার দিয়ে দ্রবীভূত করুন।

3নমুনাটি মাইক্রোপ্লেটের সংখ্যার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ হওয়া উচিত, প্রতিটি প্লেটে নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের 3 টি গর্ত, ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের 2 টি গর্ত এবং ফাঁকা নিয়ন্ত্রণের 1 টি গর্ত সরবরাহ করা উচিত।(দুই তরঙ্গদৈর্ঘ্যের সনাক্তকরণের সাথে সনাক্ত করা হলে, কোন ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ কূপ সেট করা অনুমোদিত নয়) ।

দ্রষ্টব্যঃ ক্রস দূষণ এড়াতে প্রতিটি নমুনা, নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি পৃথক নিষ্পত্তি পাইপেট টিপ ব্যবহার করুন।

4. 50μL নমুনা সংশ্লিষ্ট কূপের মধ্যে যোগ করুন (যখন এই কিটটি ক্লিনিকাল সহায়ক নির্ণয়ের জন্য ব্যবহার করা হয়, তখন পরীক্ষার জন্য নমুনাটি 1:30 এ স্বাভাবিক লবণীয় দ্রবণ দিয়ে দ্রবীভূত করা উচিত।যখন এটি এপিডেমিওলজিক্যাল গবেষণার জন্য ব্যবহৃত হয়, মূল নমুনা সনাক্ত করা যেতে পারে ), নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ কূপ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ কূপগুলিতে 50μL নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ যোগ করুন।যথাক্রমে এনজাইম কনজুগেট 50μL যোগ করা হচ্ছে (খালি কূপে যোগ করবেন না).

5. একটি দোলক দিয়ে 30 সেকেন্ডের জন্য কাঁপুন (এই ধাপটি খুব গুরুত্বপূর্ণ) । সিলিং প্লেট ঝিল্লি প্লেট সিলিং সঙ্গে 37 °C এ 30 মিনিটের জন্য incubate।

6. ইনকিউবেশনের শেষে, প্লেট কভারটি সরিয়ে ফেলুন এবং ফেলে দিন। বের করে নিন, 20 সেকেন্ডের জন্য প্রতিটি কূপে ওয়াশিং বাফার যোগ করুন। 5 বার পুনরাবৃত্তি করুন। শেষ ওয়াশিং চক্রের পরে, আপনি আপনার ডিভাইসটি ধুয়ে ফেলতে পারেন।প্লেটটি ব্লাটিং পেপার বা পরিষ্কার তোয়ালেতে ঘুরিয়ে দিন, এবং কোন অবশিষ্টাংশ অপসারণ করার জন্য এটি ট্যাপ করুন।

7. Substrate A (50μL) এবং Substrate B (50μL) যোগ করুন (খালি কূপে যোগ করবেন না) । ঝাঁকুনি দিয়ে নরমভাবে মিশ্রিত করুন। সিলিং প্লেট ঝিল্লি দিয়ে প্লেটটি সিলিং করে 37 °C এ 15 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন।

8. প্রতিটি কূপে 50μL স্টপ সলিউশন যোগ করুন (খালি কূপে যোগ করবেন না) । ঝাঁকুনি দিয়ে নরমভাবে মিশ্রিত করুন, প্রতিক্রিয়া বন্ধ হওয়ার 10 মিনিটের মধ্যে শোষণযোগ্যতা পড়ুন।খালি ভাল সঙ্গে প্লেট রিডার calibrate এবং 450nm এ শোষণ পড়া. যদি একটি দ্বৈত ফিল্টার যন্ত্র ব্যবহার করা হয়, 630nm এ রেফারেন্স তরঙ্গদৈর্ঘ্য সেট করুন। যদি সনাক্ত করতে দ্বৈত তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করা হয় তবে কোনও ফাঁকা কূপ সেট করার অনুমতি নেই। কাট-অফ মান গণনা করুন এবং ফলাফলগুলি মূল্যায়ন করুন।