অ্যান্টিবডি (আইজিই) ELISA টেস্ট কিট

উদ্দেশ্যযুক্ত ব্যবহার

  এই কিটটি মানব সিরাম/প্লাস্মাতে মোট IgE অ্যান্টিবডি (IgE) এর পরিমাণগত সনাক্তকরণ। এই ফলাফলটি টাইপ I অ্যালার্জির নির্ণয় করতে সহায়তা করতে পারে।প্যারাসাইটিক রোগের সন্দেহযুক্ত রোগীদের জন্যও মোট IgE পরীক্ষা করার পরামর্শ দেওয়া যেতে পারে।.

পরীক্ষার নীতি

  তাত্ক্ষণিক হাইপারসেনসিটিভিটি (টাইপ-১ এলার্জি) নির্দিষ্ট IgE দ্বারা মধ্যস্থতা করা হয়। IgE এর ঘনত্ব 6 থেকে 15 বছর বয়সের মধ্যে স্বাভাবিক সিরাম পিকগুলিতে।রোগীদের মধ্যে নির্দিষ্ট IgE এর বৃদ্ধি মোট IgE টিটারের বৃদ্ধি সহ হয়. এই ক্ষেত্রে, টাইটারটি ১,০০০ গুণ পর্যন্ত যেতে পারে। সাধারণভাবে, প্রতি মিলিলিটারে আন্তর্জাতিক একক (আইইউ / এমএল) সংজ্ঞায়িত করা হয়ঃ ১ আইইউ / এমএল সমতুল্য ২.৪ এনজি আইজিই। বংশগত অ্যালার্জিক ডার্মাটাইটিস রোগীদের মধ্যে,আইজিই স্তর ৫০ পর্যন্ত হতে পারেএছাড়াও, প্যারাসাইটিক রোগে আক্রান্ত রোগীদের IgE টিটারের মাত্রা বৃদ্ধি পায়। স্বাভাবিকের চেয়ে উচ্চতর পরীক্ষার ফলাফলগুলিও নিশ্চিত অটোইমিউন রোগের প্রভাব বিবেচনা করা উচিত।

সুস্থ ব্যক্তিদের শারীরিক পরীক্ষার জন্য রিএজেন্টের প্রস্তাব দেওয়া হয় না, শুধুমাত্র সংশ্লিষ্ট IgE অ্যান্টিবডি পরীক্ষার ইতিবাচক বা নেতিবাচক ফলাফলের জন্য ইতিবাচক বা নেতিবাচক পরীক্ষার ফলাফল,অনিশ্চয়তা রোগীর সাথে সম্পর্কিত এবং রোগীদের মূল্যায়নের একমাত্র সূচক হতে পারে না, রোগীর ক্লিনিকাল উপস্থাপনা এবং রোগের সমন্বিত বিশ্লেষণের জন্য অন্যান্য ল্যাবরেটরি পরীক্ষার সাথে একত্রিত করা উচিত।

এই কিটের সনাক্তকরণ পদ্ধতি হল এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোএসেজ। এই রিএজেন্টে, ডাবল অ্যান্টিবডি স্যান্ডউইচ ইমিউনোএসেজের নীতি গ্রহণ করা হয়েছিল।অ্যান্টি-আইজিই সনাক্তকারী একক ক্লোনাল অ্যান্টিবডিগুলি মাইক্রোপ্লেটের গর্তে প্রাক-আচ্ছাদিত ছিল, এবং মানব সিরাম/প্লাস্মা নমুনা এবং এনজাইম-ম্যাপযুক্ত অন্য একক ক্লোনাল অ্যান্টিবডি প্লেটের ছিদ্রগুলিতে যুক্ত করা হয়েছিল। ইনকিউবেশন এবং ধোয়ার পরে, সাবস্ট্র্যাট সমাধান যুক্ত করা হয়েছিল।OD মান পড়া হয় এবং এর বিষয়বস্তু একটি microplate পাঠক দ্বারা গণনা করা হয়.

পরীক্ষার পদ্ধতি

1.ব্যবহারের আগে সমস্ত রিএজেন্টকে ১৫ মিনিট রুমের তাপমাত্রায় থাকতে দেওয়া উচিত।

2ব্যবহারের আগে ওয়াশ বাফারকে ১ঃ৪০ ডিসটিলড ওয়াটার দিয়ে দ্রবীভূত করুন।

3নমুনাটি মাইক্রো প্লেটের সংখ্যার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ হওয়া উচিত, প্রতিটি প্লেটে রেফারেন্স কূপ সরবরাহ করা উচিত (কূপের সংখ্যা রেফারেন্স এবং পরীক্ষার নমুনার দ্বারা নির্ধারিত হয়) ।

দ্রষ্টব্যঃ প্রতিটি নমুনার জন্য একটি পৃথক নিষ্পত্তি পাইপেট টিপ ব্যবহার করুন, ক্রস দূষণ এড়ানোর জন্য প্রতিটি রেফারেন্স।

4সংশ্লিষ্ট কূপের মধ্যে 100μL নমুনা দ্রাবক যোগ করুন, সংশ্লিষ্ট কূপের প্রতিটি রেফারেন্স S0, S1, S2, S3, S4, S5 এবং নমুনাতে 20μL যোগ করুন।

5. মিশ্রিত করার জন্য সাবধানে ঝাঁকুন। সিলিং প্লেট ঝিল্লি প্লেট সিলিং সঙ্গে 37 °C এ 30 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট।

6. ইনকিউবেশনের শেষে, প্লেট কভারটি সরিয়ে ফেলুন এবং ফেলে দিন। বের করে নিন, 10 সেকেন্ডের জন্য প্রতিটি কূপে ওয়াশিং বাফার যুক্ত করুন। 5 বার পুনরাবৃত্তি করুন। শেষ ওয়াশিং চক্রের পরে, আপনি আপনার ডিভাইসটি ধুয়ে ফেলতে পারেন।প্লেটটি ব্লাটিং পেপার বা পরিষ্কার তোয়ালেতে ঘুরিয়ে দিন, এবং কোন অবশিষ্টাংশ অপসারণ করার জন্য এটি ট্যাপ করুন।

7. যথাক্রমে কনজুগেট 100μL যোগ করা। সিলিং প্লেট ঝিল্লি প্লেট সিলিং সঙ্গে 37 °C এ 30 মিনিট জন্য incubate।

8৬ নং ধাপের মতো প্লেট ধুয়ে ফেলুন।

9. Substrate A (50μL) এবং Substrate B (50μL) যোগ করুন। মিশ্রণের জন্য নরমভাবে ঝাঁকুনি দিন। সিলিং প্লেট ঝিল্লি দিয়ে প্লেটটি সিলিং করে 37°C এ 10 মিনিট ইনকিউবেট করুন।

10. প্রতিটি কূপে 50μL স্টপ সলিউশন যোগ করুন। ঝাঁকুনি দিয়ে নরমভাবে মিশ্রিত করুন, প্রতিক্রিয়া বন্ধ করার 10 মিনিটের মধ্যে শোষণযোগ্যতা পড়ুন।তারপর মাইক্রোপ্লেট রিডার দিয়ে 450nm/ 630nm এ শোষণের মান পড়ুন. ঘনত্ব গণনা করুন এবং ফলাফলগুলি মূল্যায়ন করুন।