EBV-VCA IgA Ab টেস্ট ELISA Kit এনজাইম Immunoassay টেস্ট প্লাজমা নমুনা

EBV-VCA IgA Ab ELISA কিট ক্যাটালগ নং: BE501A
Epstein-Barr ভাইরাস (EBV) এর ভাইরাল ক্যাপসিড অ্যান্টিজেন (VCA) এর IgA অ্যান্টিবডি সনাক্তকরণের জন্য এনজাইম ইমিউনোসাই।
 
1. অ্যাসের মূলনীতি
EBV-VCA IgA Ab ELISA কিট একটি সনাক্তকরণ ব্যবস্থা ব্যবহার করে যেখানে মাইক্রোপ্লেট কূপগুলি একটি উচ্চ অ্যান্টিজেনিক সেগমেন্ট EBV-VCA এর সাথে সম্পর্কিত রিকম্বিন্যান্ট অ্যান্টিজেন দিয়ে লেপা হয়।সিরাম বা প্লাজমা নমুনা, নিয়ন্ত্রণ কূপ যোগ করা হয়.ইনকিউবেশনের সময়, নমুনায় উপস্থিত EBV-VCA-এর জন্য নির্দিষ্ট IgA অ্যান্টিবডিগুলি মাইক্রোপ্লেট কূপের উপর স্থির রিকম্বিন্যান্ট অ্যান্টিজেনের সাথে আবদ্ধ হবে।কূপগুলিকে আবদ্ধ উপাদানগুলি অপসারণ করার জন্য ধুয়ে ফেলা হয় এবং মানব-বিরোধী IgA পারক্সিডেস কনজুগেট অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি কমপ্লেক্সের সাথে আবদ্ধ হবে এবং অতিরিক্ত আনবাউন্ড এনজাইম কনজুগেটগুলি আবার ধোয়ার মাধ্যমে মুছে ফেলা হয়।এনজাইম সাবস্ট্রেট, টেট্রামেথাইলবেনজিডাইন (টিএমবি), যোগ করা হয় ইনকিউবেশনের পরে সাবস্ট্রেটটি আবদ্ধ এনজাইম দ্বারা হাইড্রোলাইজ করা হবে এবং EBV-VCA IgA অ্যান্টিবডি ধারণকারী কূপে একটি নীল বা নীল-সবুজ রঙ বিকশিত হয়।সালফিউরিক এসিড যোগ করে এনজাইমের বিক্রিয়া বন্ধ হয়ে যায়।বিকশিত রঙের তীব্রতা স্পেকট্রোফটোমেট্রিকভাবে 450nm (450 nm/630 nm) এ পড়া হয় এবং নমুনায় উপস্থিত অ্যান্টিবডির পরিমাণের সমানুপাতিক।
রিএজেন্টস
 
2. কিটগুলির সাথে সরবরাহ করা সামগ্রী:

 
3. পরীক্ষা পদ্ধতি

1. ব্যবহারের আগে ELISA কিট (সমস্ত রিএজেন্ট) এবং নমুনাগুলিকে ঘরের তাপমাত্রায় আনুন (প্রায় 30 মিনিট)।
2. ddH2O দিয়ে ঘনীভূত ওয়াশ বাফার 1:19 পাতলা করুন।উদাহরণস্বরূপ, 5 মিলি ওয়াশ বাফার কনসেনট্রেটকে ডিওনাইজড বা পাতিত জল দিয়ে মোট 100 মিলি পরিমাণে পাতলা করতে হবে।
3. প্রতিটি পরীক্ষার জন্য, একটি ফাঁকা ভাল ব্যাকগ্রাউন্ড নিয়ন্ত্রণ, দুটি ইতিবাচক এবং তিনটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ সেট করুন।100ml পজিটিভ কন্ট্রোল এবং নেগেটিভ কন্ট্রোল সদৃশ পৃথক কূপে বিতরণ করুন।খালি কূপে নমুনা বা এইচআরপি-কনজুগেট যোগ করা উচিত নয়।
4. 100ml স্যাম্পল ডিলিউশন কন্ট্রোল ব্যতীত পৃথক পরীক্ষা কূপের মধ্যে ছড়িয়ে দিন।
5. পরীক্ষার কূপগুলিতে প্রতিটি পরীক্ষার নমুনার 10 মিলি যোগ করুন;ঘূর্ণি মিশ্রিত.
6. 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন
7. পাতলা ধোয়ার বাফার দিয়ে প্রতিটি কূপ 5 বার পূরণ করে প্রতিটি কূপ ধুয়ে ফেলুন, তারপর সমস্ত জল বের করার জন্য প্লেটটিকে জোরে জোরে উল্টে দিন এবং কয়েক সেকেন্ডের জন্য শোষক কাগজে কূপের রিম ব্লক করুন।
8. প্রতিটি কূপে 100 মিলি এনজাইম কনজুগেট যোগ করুন।1 মিনিটের জন্য ফ্ল্যাট বেঞ্চে মাইক্রোটাইটার প্লেটটি ঘুরিয়ে আলতোভাবে মেশান।ফাঁকা কূপে এনজাইম কনজুগেট যোগ করবেন না।
9. 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 20 মিনিটের জন্য ইনকিউবেট করুন
10. ধাপ 7 হিসাবে প্লেটটি 5 বার ধুয়ে ফেলুন।
11. প্রতিটি কূপে সাবস্ট্রেট সলিউশন A (HRP-সাবস্ট্রেট) এর এক ফোঁটা (50ml) যোগ করুন, তারপর প্রতিটি কূপে এক ড্রপ (50ml) সাবস্ট্রেট সলিউশন B (TMB) যোগ করুন।আলতোভাবে মেশান এবং 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের জন্য সেঁকুন।.
12. রঙের প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে প্রতিটি কূপে এক ফোঁটা (50 মিলি) স্টপ সলিউশন যোগ করুন।ডুয়াল ফিল্টার প্লেট রিডার সহ 450 nm/630 nm এ OD মান পড়ুন।এটি একক ফিল্টার প্লেট রিডার সহ 450 nm এ OD মান পড়ার বিকল্প।(সমস্ত কূপ থেকে সমস্ত OD রিডিং সংশোধন করতে ফাঁকা কূপের OD মান ব্যবহার করে)