পরীক্ষার নীতি
এই কিটটি রাট সিরাম, কোষ সংস্কৃতি সুপারনেট এবং অন্যান্য জৈবিক তরলগুলিতে P53 ঘনত্ব নির্ধারণের অনুমতি দেয়
নমুনার মধ্যে মানব সিডি১৬ মাত্রা পরীক্ষা করতে কিট ব্যবহার করা হয়, বিশুদ্ধ মানব সিডি১৬ অ্যান্টিবডি ব্যবহার করা হয় মাইক্রোটাইটার প্লেট কূপ আবরণ করতে, কঠিন পর্যায়ে অ্যান্টিবডি তৈরি করা হয়, তারপর কূপের সিডি১৬ যোগ করা হয়,সংযুক্ত সিডি১৬ অ্যান্টিবডি যা HRP লেবেলযুক্তসম্পূর্ণরূপে ধুয়ে ফেলার পর, টিএমবি সাবস্ট্রেট সলিউশন যোগ করুন, টিএমবি সাবস্ট্রেট নীল রঙের হয়ে যায়।প্রতিক্রিয়াটি সালফুরিক অ্যাসিডের দ্রবণ যোগ করে শেষ হয় এবং রঙের পরিবর্তনটি 450 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যে বর্ণনাকারীভাবে পরিমাপ করা হয়তারপর নমুনায় মানব সিডি১৬ এর ঘনত্ব নির্ধারণ করা হয় নমুনার ওডি-কে স্ট্যান্ডার্ড কার্ভের সাথে তুলনা করে।
k এর সাথে সরবরাহিত উপাদানএটা
| 1 |
ওয়াশিং সলিউশন |
২০ মিলি × ১ বোতল |
7 |
সমাধান বন্ধ করুন |
6 মিলি × 1 বোতল |
| 2 |
এইচআরপি-কনজিগেট রিএজেন্ট |
6 মিলি × 1 বোতল |
8 |
স্ট্যান্ডার্ড ((২০ μg/L) |
0.5 মিলি × 1 বোতল |
| 3 |
মাইক্রোলিসা স্ট্রিপলেট |
12well × 8 স্ট্রিপ |
9 |
স্ট্যান্ডার্ড ডিলেন্ট |
1.৫ মিলি × ১ বোতল |
| 4 |
নমুনা দ্রবণীয় |
6 মিলি × 1 বোতল |
10 |
নির্দেশাবলী |
1 |
| 5 |
ক্রোমোজেন সলিউশন এ |
6 মিলি × 1 বোতল |
11 |
বন্ধনী প্লেটের ঝিল্লি |
2 |
| 6 |
ক্রোমোজেন সলিউশন বি |
6 মিলি × 1 বোতল |
12 |
সিল করা ব্যাগ |
1 |
নমুনার প্রয়োজনীয়তা
- নমুনা সংগ্রহের পর যত তাড়াতাড়ি সম্ভব বের করা উচিত এবং প্রাসঙ্গিক সাহিত্যের মতে, বের করার পর যত তাড়াতাড়ি সম্ভব পরীক্ষা করা উচিত। যদি এটি সম্ভব না হয়,নমুনা সংরক্ষণের জন্য -২০ ডিগ্রি সেলসিয়াসে রাখা যেতে পারে, পুনরাবৃত্তিকৃত হিমায়ন-নমন চক্র এড়িয়ে চলুন।
- NaN3 ধারণকারী নমুনা সনাক্ত করা যায় না, কারণ NaN3 HRP সক্রিয় বাধা দেয়।
মূল্যায়ন পদ্ধতি
- দ্রবীভূত করুন এবং নমুনা যোগ করুনঃদ্রবীভূত করুন মূল ঘনত্ব নিম্নলিখিত টেবিলের মতো মানঃ
| 10μg/L |
5 স্ট্যান্ডার্ড |
150μl মূল ঘনত্ব স্ট্যান্ডার্ড+150μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলেন্ট |
| 5μg/L |
4 স্ট্যান্ডার্ড |
150μl 5 স্ট্যান্ডার্ড + 150μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলেন্ট |
| 2.5μg/L |
3 স্ট্যান্ডার্ড |
150μl 4 স্ট্যান্ডার্ড + 150μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলেন্ট |
| 1.২৫ মাইক্রোগ্রাম/লিটার |
2 স্ট্যান্ডার্ড |
150μl 3 স্ট্যান্ডার্ড + 150μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলেন্ট |
| 0.625μg/L |
1 স্ট্যান্ডার্ড |
150μl 2 স্ট্যান্ডার্ড + 150μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলেন্ট |
2. নমুনা যোগ করুনঃ ফাঁকা কূপগুলি আলাদাভাবে সেট করুন (ফাঁকা তুলনা কূপগুলিতে নমুনা এবং এইচআরপি-কনজিগেট রিএজেন্ট যোগ করা হয় না, অন্যথায় প্রতিটি ধাপের অপারেশন একই) । পরীক্ষার নমুনা কূপ।মাইক্রোলিসা স্ট্রিপলেটটিতে 50μl স্ট্যান্ডার্ড যোগ করুন, পরীক্ষার নমুনা কূপের মধ্যে নমুনা হ্রাস 40μl যোগ করুন, তারপরে পরীক্ষার নমুনা 10μl যোগ করুন (নমুনা চূড়ান্ত হ্রাস 5 গুণ), কূপগুলিতে নমুনা যোগ করুন, যতটা সম্ভব কূপের প্রাচীর স্পর্শ করবেন না এবং সাবধানে মিশ্রিত করুন।
3. ইনকিউবেট করুনঃ ক্লোজার প্লেট ঝিল্লি দিয়ে প্লেট বন্ধ করার পরে, 37°C এ 30 মিনিট ইনকিউবেট করুন।
4. তরল কনফিগার করুনঃ ৩০ (অথবা ২০) গুণ ওয়াশ সলিউশন ডিস্টিলড ওয়াটার এবং রিজার্ভের সাথে ৩০ (অথবা ২০) গুণ দ্রবীভূত।
5. ধোয়াঃ বন্ধ প্লেট ঝিল্লি উন্মোচন, নিক্ষেপ তরল, সুইং দ্বারা শুকনো, প্রতিটি পুঁজ মধ্যে ওয়াশিং বাফার যোগ, 30s জন্য এখনও তারপর ড্রেন, 5 বার পুনরাবৃত্তি, pat দ্বারা শুকনো।
6. এনজাইম যোগ করুনঃএইচআরপি-কনজিগেট রিএজেন্ট 50μl প্রতিটি কূপে যোগ করুন, ফাঁকা কূপ ছাড়া।
7. ইনকিউবেট: অপারেশন ৩।
8. ধোয়ার পদ্ধতিঃ ৫ দিয়ে অপারেশন।
9.color:প্রতিটি কূপে ক্রোমোজেন সলিউশন A 50ul এবং ক্রোমোজেন সলিউশন B 50ul যোগ করুন, 37°C এ 15 মিনিটের জন্য আলোর সংরক্ষণ এড়ান
10.প্রতিক্রিয়া বন্ধ করুন:প্রতিটি পুঁজকে স্টপ সলিউশন ৫০μl যোগ করুন, প্রতিক্রিয়া বন্ধ করুন ((নীল রঙ হলুদ রঙের পরিবর্তন) ।
11. টেস্টঃ শূন্য হিসাবে ফাঁকা ভাল নিন, 450nm এ শোষণযোগ্যতা পড়ুন এবং 15 মিনিটের মধ্যে সমাধান বন্ধ করুন।
আপনার বার্তাটি 20-3,000 টির মধ্যে হতে হবে!
