|
পণ্যের বিবরণ:
|
| উদ্দেশ্য: | শুধুমাত্র গবেষণা ব্যবহারের জন্য | স্টোরেজ: | 2-8℃ |
|---|---|---|---|
| স্পেসিফিকেশন: | 48ওয়েল/96ওয়েল | পদ্ধতি: | স্যান্ডউইচ |
| Cat. বিড়াল No. না.: | ইন-Mo1153 | সিভি(%): | SD/meanX100 |
| বিশেষভাবে তুলে ধরা: | ই ক্যাডেরিন এলিসা কিট,মাউস ই ক্যাড এলিসা কিট,গবেষণা ই ক্যাডেরিন এলিসা কিট |
||
মাউস ই-ক্যাডেরিন, ই-ক্যাড এলিসা কিট
এই ELISA কিট পদ্ধতি হিসাবে স্যান্ডউইচ-ELISA ব্যবহার করে।এই কিটে প্রদত্ত মাইক্রোইলিসা স্ট্রিপপ্লেটটি ই-ক্যাডের জন্য নির্দিষ্ট একটি অ্যান্টিবডি দিয়ে প্রি-কোটেড করা হয়েছে।মান বা নমুনাগুলি উপযুক্ত মাইক্রোইলিসা স্ট্রিপপ্লেট কূপে যোগ করা হয় এবং নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডির সাথে মিলিত হয়।তারপর একটি Horseradish Peroxidase (HRP)- E-Cad-এর জন্য নির্দিষ্ট কনজুগেটেড অ্যান্টিবডি প্রতিটি মাইক্রোইলিসা স্ট্রিপ্লেটে ভালোভাবে যোগ করা হয় এবং ইনকিউব করা হয়।বিনামূল্যে উপাদান দূরে ধুয়ে হয়.প্রতিটি কূপে টিএমবি সাবস্ট্রেট দ্রবণ যোগ করা হয়।শুধুমাত্র ই-ক্যাড এবং এইচআরপি কনজুগেটেড ই-ক্যাড অ্যান্টিবডি ধারণ করা কূপগুলি নীল রঙে প্রদর্শিত হবে এবং তারপরে স্টপ দ্রবণ যোগ করার পরে হলুদ হয়ে যাবে।অপটিক্যাল ঘনত্ব (OD) 450 nm তরঙ্গদৈর্ঘ্যে স্পেকট্রোফটোমেট্রিকভাবে পরিমাপ করা হয়।OD মান E-Cad এর ঘনত্বের সমানুপাতিক।আপনি আদর্শ বক্ররেখার সাথে নমুনার OD তুলনা করে নমুনায় E-Cad-এর ঘনত্ব গণনা করতে পারেন।
কিটের সাথে সরবরাহ করা সামগ্রী
| কিটের সাথে সরবরাহ করা সামগ্রী | 48 সংকল্প | 96 সংকল্প | স্টোরেজ | |
| 1 | ব্যবহার বিধি | 1 | 1 | আরটি |
| 2 | ক্লোজার প্লেট মেমব্রেন | 2 | 2 | আরটি |
| 3 | সিল করা ব্যাগ | 1 | 1 | আরটি |
| 4 | মাইক্রোইলিসা স্ট্রিপ্লেট | 1 | 1 | 2-8℃ |
| 5 | স্ট্যান্ডার্ড: 108pg/ml | 0.5 মিলি × 1 বোতল | 0.5 মিলি × 1 বোতল | 2-8℃ |
| 6 | স্ট্যান্ডার্ড diluent | 1.5 মিলি × 1 বোতল | 1.5 মিলি × 1 বোতল | 2-8℃ |
| 7 | এইচআরপি-কঞ্জুগেট বিকারক | 3 মিলি × 1 বোতল | 6 মিলি × 1 বোতল | 2-8℃ |
| 8 | নমুনা diluent | 3 মিলি × 1 বোতল | 6 মিলি × 1 বোতল | 2-8℃ |
| 9 | ক্রোমোজেন সলিউশন A | 3 মিলি × 1 বোতল | 6 মিলি × 1 বোতল | 2-8℃ |
| 10 | ক্রোমোজেন সলিউশন বি | 3 মিলি × 1 বোতল | 6 মিলি × 1 বোতল | 2-8℃ |
| 11 | সমাধান বন্ধ করুন | 3 মিলি × 1 বোতল | 6 মিলি × 1 বোতল | 2-8℃ |
| 12 | সমাধান ধোয়া | 20ml (20X)×1 বোতল | 20ml (30X)×1 বোতল | 2-8℃ |
পদ্ধতি
মান তরলীকরণ
1. দশটি কূপ একটি মাইক্রোইলিসা স্ট্রিপপ্লেটে মানদণ্ডের জন্য সেট করা আছে।ওয়েল 1 এবং ওয়েল 2 এ, 100μl স্ট্যান্ডার্ড দ্রবণ এবং 50μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলিউশন বাফার যোগ করা হয় এবং ভালভাবে মিশ্রিত করা হয়।কূপ 3 এবং কূপ 4 এ, কূপ 1 এবং কূপ 2 থেকে 100μl দ্রবণ যথাক্রমে যোগ করা হয়।তারপরে 50μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলিউশন বাফার যোগ করা হয় এবং ভালভাবে মিশ্রিত করা হয়।কূপ 3 এবং কূপ 4 থেকে 50μl দ্রবণ বাতিল করা হয়। কূপ 5 এবং কূপ 6-এ, কূপ 3 এবং কূপ 4 থেকে যথাক্রমে 50μl দ্রবণ যোগ করা হয়।তারপরে 50μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলিউশন বাফার যোগ করা হয় এবং ভালভাবে মিশ্রিত করা হয়।কূপ 7 এবং কূপ 8 এ, কূপ 5 এবং কূপ 6 থেকে 50μl দ্রবণ যথাক্রমে যোগ করা হয়।তারপরে 50μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলিউশন বাফার যোগ করা হয় এবং ভালভাবে মিশ্রিত করা হয়।কূপ 9 এবং কূপ 10 এ, কূপ 7 এবং কূপ 8 থেকে 50μl দ্রবণ যথাক্রমে যোগ করা হয়।তারপরে 50μl স্ট্যান্ডার্ড ডিলিউশন বাফার যোগ করা হয় এবং ভালভাবে মিশ্রিত করা হয়।9 এবং কূপ 10 থেকে 50μl দ্রবণ বাতিল করা হয়। পাতলা করার পরে, সমস্ত কূপের মোট আয়তন হয় 50μl এবং ঘনত্ব যথাক্রমে 24ng/ml,16 ng/ml,8 ng/ml,4ng/ml এবং 2ng/ml .
2. মাইক্রোইলিসা স্ট্রিপপ্লেটে, ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ হিসাবে একটি কূপ খালি রাখুন।নমুনা কূপগুলিতে, 40μl স্যাম্পল ডিলিউশন বাফার এবং 10μl নমুনা যোগ করা হয় (ডাইলুশন ফ্যাক্টর 5)।নমুনাগুলি ভাল প্রাচীর স্পর্শ না করে নীচের দিকে লোড করা উচিত।মৃদু নেড়ে ভালো করে মিশিয়ে নিন।
3. ইনকিউবেশন: ক্লোজার প্লেট মেমব্রেন দিয়ে সীলমোহর করার পর 37℃ এ 30 মিনিট সেঁকুন।
4. পাতলা করা: পাতিত জল দিয়ে ঘনীভূত ওয়াশিং বাফার পাতলা করুন (96T এর জন্য 30 বার এবং 48T এর জন্য 20 বার)।
5. ওয়াশিং: সাবধানে ক্লোজার প্লেট মেমব্রেন খোসা ছাড়ুন, অ্যাসপিরেট করুন এবং ধোয়ার দ্রবণ দিয়ে রিফিল করুন।30 সেকেন্ডের জন্য বিশ্রামের পরে ধোয়ার দ্রবণটি ফেলে দিন।ধোয়ার পদ্ধতিটি 5 বার পুনরাবৃত্তি করুন।
6. ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ কূপ ছাড়া প্রতিটি কূপে 50 μl HRP-কনজুগেট বিকারক যোগ করুন।
7. ধাপ 3 এ বর্ণিত ইনকিউবেশন।
8. ধাপ 5 এ বর্ণিত ওয়াশিং।
9. রঙ করা: প্রতিটি কূপে 50 μl ক্রোমোজেন সলিউশন A এবং 50 μl ক্রোমোজেন সলিউশন B যোগ করুন, আলতোভাবে ঝাঁকুনি দিয়ে মিশ্রিত করুন এবং 15 মিনিটের জন্য 37 ℃ এ ইনকিউবেট করুন।রং করার সময় আলো এড়িয়ে চলুন।
10. সমাপ্তি: প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে প্রতিটি কূপে 50 μl স্টপ দ্রবণ যোগ করুন।কূপের রঙ নীল থেকে হলুদে পরিবর্তিত হওয়া উচিত।
11. একটি মাইক্রোটাইটার প্লেট রিডার ব্যবহার করে 450nm এ শোষণ ওডি পড়ুন।ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ কূপের OD মান শূন্য হিসাবে সেট করা হয়েছে।স্টপ দ্রবণ যোগ করার পরে 15 মিনিটের মধ্যে পরীক্ষা করা উচিত।
যথার্থতা
ইন্ট্রা-অ্যাস যথার্থতা (একটি অ্যাসের মধ্যে যথার্থতা): নিম্ন, মধ্যম এবং উচ্চ স্তরের ই-ক্যাড সহ 3টি নমুনা যথাক্রমে একটি প্লেটে 20 বার পরীক্ষা করা হয়েছিল।
ইন্টার-অ্যাস যথার্থতা (অ্যাসের মধ্যে যথার্থতা): নিম্ন, মধ্য এবং উচ্চ স্তরের ই-ক্যাড সহ 3টি নমুনা 3টি ভিন্ন প্লেটে পরীক্ষা করা হয়েছে, প্রতিটি প্লেটে 8টি প্রতিলিপি করা হয়েছে।
CV(%) = SD/meanX100
ইন্ট্রা-অ্যাস: সিভি <10%
ইন্টার-অ্যাস: সিভি <12%
পরীক্ষা পরিসীমা
0.6pg/ml -80pg/ml
সংবেদনশীলতা:
0.1 pg/ml
ব্যক্তি যোগাযোগ: Mr. Steven
টেল: +8618600464506
